Para determinar se a expressão gênica diferencial é um fenômeno que pode ser generalizado para o câncer de mama, realizamos ensaios utilizando outras amostras de fibroblastos obtidos de linfonodos comprometidos de cinco pacientes e de linfonodos não–comprometidos de outras cinco pacientes (incluindo as seis amostras de fibroblastos previamente analisadas), as quais foram co–cultivadas com três linhagens celulares de câncer de mama (MDA–MB231, MDA–MB435 e MCF–7). A expressão relativa de MAP2K3, AKAP8L e CREG1, inicialmente identificados como diferencialmente expressos em análise de cDNA microarray, foi então determinada por RT–PCR em tempo real. Observamos que nenhuma das três linhagens celulares influenciou a expressão de AKAP8L e CREG1, tanto em fibroblastos de linfonodos comprometidos quanto não–comprometidos. MAP2K3 foi hiperexpresso tanto em fibroblastos de linfonodos comprometidos quanto em não–comprometidos co–cultivados com células MDA–MB231, mas não com células MDA–MB435 ou MCF–7.

Nossos resultados indicam que a presença de células MDA–MB231 influencia o perfil de expressão gênica de fibroblastos originários tanto de linfonodos comprometidos quanto de não–comprometidos. Alguns genes comumente regulados em fibroblastos de linfonodo comprometido ou não–comprometidos, incluindo MAP2K3, podem estar envolvidos no estabelecimento de metástase regional.